*該頁面只支持下載OPM-CHO系列的CoA文件

培養基選擇與使用

• 奧浦邁常見CHO基礎培養基有哪些，如何選擇？
  • 奧浦邁常用CHO基礎培養基全部為化學成分確定（CD）培養基，有AltairCHO，VegaCHO，CD07，CD052，CD063，CDP3與CDP9；一般來說這些基礎培養基對常見CHO細胞都具有普適性。其中AltairCHO 是最新一代國際一流水準的高性能培養基，專門針對非生長因子依賴的CHO細胞而設計。VegaCHO是專門針對生長因子依賴的CHO細胞而設計，比如CHOZN，同樣屬于最新一代國際一流水準的高性能培養基。針對于現有進口培養基的替代，我們的CD07，CD063和CDP9更適合CHO K1與CHO-S細胞；CD052與CDP3更適合CHOZN細胞（生長因子依賴）。
• 奧浦邁常見CHO補料培養基有哪些，如何選擇？
  • 奧浦邁常用CHO補料培養基全部為化學成分確定（CD）補料。AltairCHO Feed 與VegaCHO Feed是最新一代國際一流水準的高性能補料。另外的化學成分確定的補料有CDF18+CDF26、CDXF01+CDFS08和CDF056V+CDFS06，均適合于針對于現有進口培養基的替代。
• 奧浦邁常見CHO培養基的使用方案
  • 配液及使用方案請見產品手冊。測試方案請聯系我們的技術支持團隊。
• 奧浦邁CHO干粉培養基配制需要注意哪些方面？
  • 配液及使用方案請見產品手冊。測試方案請聯系我們的技術支持團隊。
• 在培養基配制說明中的時間設定是怎么確定的？或者說是否可以提供更詳細的時間信息？
  • 配液及使用方案請見產品手冊。攪拌時間是在我們QC小量和工藝較大體積多批次配制后定下的經驗值，如果水溫低，需要適當增加攪拌時間。我們工藝配制50L或100L+培養基時，
    （1）向水中緩慢加入粉末，盡量避免結團，攪拌20min;
    （2）添加NaHCO, 再攪拌20min;
    （3）調酸堿/定容/添加NaCl的操作，每個操作后攪拌5~10 min
• 添加1g/L NaCL至培養基，滲透壓會提高多少？
  • 我們滲透壓的計算：每添加1g/L NaCL 約增加31.5 mOsm/kg
• 如何避免超濃縮補料析出？
  • 盡量避免pH和溫度的強烈波動，配制時的pH盡量高一些，可以到10.8-11.0；也建議使用時不要進大量空氣。

細胞相關

• CHO細胞從其他培養基轉入奧浦邁培養基，是否需要適應？
  • 細胞馴化方案請見產品手冊。簡單來說馴化直接適應和間接適應兩種，如果原培養基為CD培養基，一般直接適應即可。建議在奧浦邁培養基中傳代至少3次，再做后續實驗。
• 細胞復蘇后一般可以傳幾代？
  • 需要單克隆傳代穩定性數據，一般25代后建議重新復蘇。
• 細胞轉染后，如何提高單克隆生長？
  • 1.調節CO₂培養箱濃度， 2.用30%條件培養基，3.補加Supplement。
• 細胞復蘇，生長穩定后，需要建多少支細胞作為細胞庫？
  • 根據不同需求，可以建一級或多級細胞庫，每級庫30-200支。
• CHO細胞從貼壁馴化至懸浮，會有哪些表現？
  • 貼壁的CHO細胞馴化至懸浮，（1）可能有細胞結團現象；（2）細胞生長的速度一開始也比較慢，可能3天翻一倍甚至更少。需要選一款培養基，如CD07，CD08，CDP3，逐步降血清至完全無血清。繼續傳代，細胞倍增時間會縮短。
• 奧浦邁培養基內毒素控制在什么范圍？
  • （1）基礎培養基控制在＜1.0 EU/ml，（2）補料控制在＜10 EU/ml，（3）超濃縮補料因為pH高，對內毒檢測有干擾，所以一般只是作為內控，客戶有要求的可以寫在COA上，如CDFS08
• 奧浦邁對CD培養基的定義是什么，包括Insulin和IgF-1嗎？
  • 我們把胰島素和IgF-1也定義為CD，但培養基里若含有這些成分，我們會明確告知客戶。
• 培養基中含胰島素和IGF-1的區別？
  • 胰島素和IGF-1的功能相似，都是促進細胞對葡萄糖的利用。胰島素是一種藥物，采購不方便，而且需要檢測殘留。
• 補料中是否含有谷氨酰胺？
  • 我們的補料中都不含谷氨酰胺；如含有谷氨酰胺，我們會標明。
• 補料中含糖量多少？
  • 補料1中一般含有30-80 g/L糖，具體可以咨詢技術支持或工藝部門。補料2不含糖。
• 奧浦邁培養基中是否含有抗結團劑，F68？
  • 大部分CHO培養基中都會含有抗結團劑和F68，CD07和CD08不含抗結團劑。

工藝與產品質量改善

• 一般從哪些方面考慮提高產量？
  • 對于特定的單克隆，一般通過提高細胞密度，延長平臺期，提高Qp。
• 一般從哪些方面考慮改善質量？
  • 目前質量方面大多考慮（1）聚體/片段，（2）酸堿峰，（3）糖型：G0，唾液酸，巖藻糖，Man5, 一般從工藝和培養基成分考慮。
• 反應器培養不能重復搖瓶數據，怎么辦？
  • 一般是反應器工藝參數設置，細胞株特點等系統問題。奧浦邁提供全方位的技術支持，我們資深的培養基優化和反應器工藝開發專家，以項目組的方式為您解決培養基使用過程中一系列問題。
• 搖瓶、反應器體積和培養基用量的計算？
  • 例如工作體積為3L的反應器，初始體積占70%，即基礎培養基2.1L；補料體積占30%，即補料為0.9L（補料1:補料2 = 10:1）；搖瓶一般30ml/125搖瓶，60ml/250ml搖瓶，培養基和補料用量計算方式一樣。
• CHO瞬轉需要降溫嗎，會有多大影響？
  • 降溫工藝對瞬轉的影響：CHO瞬轉一般都會選擇降溫，以抑制空細胞的快速增殖，項目不同影響程度不同（有時可以從約50mg/L提升至約300mg/L）；降低溫度有時會減慢產物的生成，需要延長時間。有的項目降溫不能顯著增加產量。
• Fedbatch過程中一般如何選擇接種密度？
  • Fedbatch過程中，常見接種密度為（0.5-1.0）E6/ml，如果細胞遲滯期較長，可以增加接種密度，縮短進入對數生長期的時間。
• 反應器培養工藝哪些可以影響酸峰？
  • Fedbatch過程中，降溫和調低pH設定值可以降低酸峰。
• 增加唾液酸，我們用哪個產品？
  • Gal+V2和CDFS05合用，可以提高唾液酸。有案例為3%提高至約10%。
• 降低巖藻糖（Fucose)的產品是哪個，有多大作用？
  • CDFS01可以降低巖藻糖。我們內部有項目數據：基礎培養基中添加0.5%，G0F從80%降低至2%，G0從2%提升至64%，對Titer沒有影響。
• 搖瓶和反應器的轉速設定一般在多少？
  • 搖瓶轉速在130-140 rpm; 3L反應器一般在220-250 rpm。
• 流加培養測試時，剩下的種子細胞如何處理？
  • 流加培養剩下的種子需要繼續傳代，以驗證N階段的種子細胞是否正常，可以幫助分析問題。
• 對于HHL偏高的項目，我們有哪些改進方案？
  • HHL，即少一條輕鏈的抗體，基本上無法純化去除，最好控制在1.5%以下。 如果搖瓶或小罐階段HHL占比超過3%，則最終的純度很可能低于95%，且工藝較難去除。我們可以較明確地改變培養基成分，送新的基礎和補料解決。
• 一般如何通過工藝降低酸峰？
  • 除了培養基成分，一般工藝方面可以通過（1）降溫，（2）適當縮短培養周期。
• 客戶申報時，會檢測ACA（抗細胞結團劑），消泡劑等的殘留嗎？
  • 一般需要檢測消泡劑，篩選壓力（如MSX, MTX）的殘留，不需要檢測ACA。另外，大部分培養基中本身也含有ACA。
• CHO瞬轉需要降溫嗎，會有多大影響？
  • 降溫工藝對瞬轉的影響：CHO瞬轉一般都會選擇降溫，以抑制空細胞的快速增殖，項目不同影響程度不同（有時可以從約50mg/L提升至約300mg/L）；降低溫度有時會減慢產物的生成，需要延長時間。有的項目降溫不能顯著增加產量。